細胞培養常見問題及其解決方法

更新時間：2017-09-30

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　　細胞培養常見題目及其解決

　　1. 如何選用特殊細胞系培養基？培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很輕易生長。總之，MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養是一個好的開始。

　　2. 何時須更換培養基？

　　視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數據上之更換時間，按時更換培養基即可。

　　3. 可否使用與原先培養條件不同之培養基？

　　不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基，若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基，細胞大都無法立即適應，造成細胞無法存活。

　　4 可否使用與原先培養條件不同之血清種類？

　　不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源，所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

　　5 何謂FBS, FCS, CS, HS ?

　　FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，兩者都是指胎牛血清， FCS 乃錯誤的使用字眼，請不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。

　　6 培養細胞時應使用5 % 或10% CO2？或根本沒有影響？

　　一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統，而培養基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養時應使用的CO2 濃度。當培養基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時，細胞培養時應使用10 % CO2；當培養基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時，則應使用5 % CO2 培養細胞。

　　7.Hank‘s 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用，不需要CO2培養箱。原因是什么？Hank‘s 平衡鹽溶液(HBS)和Earle‘s平衡鹽溶液(EBS)有什么本質的功能差別？

　　HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養箱中會變酸。假如希看在CO2培養箱中保存組織，需要用Eagles液，。假如僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。

　　8. 細胞之接種密度為何？

　　依照細胞株基本數據上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。

　　9. 懸浮性細胞應如何繼代處理？

　　一般僅需持續加進新鮮培養基于原培養角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養液太多時，可將培養角瓶口端稍微抬高，直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養液至另一新的培養角瓶，加進新鮮培養基稀釋至適當濃度，重復前述步驟即可。

　　10.冷凍管應如何解凍？

　　取出冷凍管后，須立即放進37 °C 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化，并留意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須留意安全，預防冷凍管之爆裂。

　　11. 細胞冷凍管解凍培養時，是否應馬上往除DMSO？

　　除少數特別注明對DMSO 敏感之細胞外，盡大部分細胞株(包括懸浮性細胞)，在解凍之后，應直接放進含有10-15ml新鮮培養基之培養角瓶中，待隔天再置換新鮮培養基以往除DMSO 即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之題目。

　　12. 附著性細胞繼代時所使用之trypsin-EDTA 濃度？應如何處理？

　　一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中，保存于–20 °C，避免反復冷凍解凍造成trypsin 之活性降低，并可減少污染之機會。

　　13.欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉速？

　　欲回收動物細胞，其離心速率一般為300xg (約1,000rpm)，5 - 10 分鐘，過高之轉速，將造成細胞死亡。

　　14. 細胞冷凍培養基之成份為何？

　　動物細胞冷凍保存時zui常使用的冷凍培養基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原來細胞生長用之新鮮培養基均勻混合之。留意：由于DMSO 稀釋時會放出大量熱能，故不可將DMSO 直接加進細胞液中，必須使用前先行配制完成。